依据国标GB T32098-2015对生物发酵法中有机酸的分类，单羧酸和二元羧酸在发酵食品中普遍存在。本文采用液相色谱仪以及复合模式色谱柱对发酵食品中4种单羧酸进行分离，流动相中未添加离子对试剂，也没有使用高水相体系，配合 WAX-1色谱柱，提高了4种有机酸的分离和保留。4种有机酸在其适宜的浓度范围内线性关系良好（10-1000ug/mL，r-2=0.9999），LOD在1.1~1.4μg/mL之间，LOQ在4~5μg/mL之间，均能满足发酵食品中单羧酸的检测要求。

【仪器/耗材清单】

1.1 仪器：高效液相色谱仪LC-5000型，配置〒紫外检测器，分析天平，离心机，组织捣碎机，研钵，三角瓶，水浴锅，过滤器

1.2 WAX-1色谱柱（250mm×4.6mm，5um）

【实验/设备条件】

2.1 乙腈（色谱纯，美国Thermo Fisher公司）；实验用水为Milli-Q去离子水；磷酸二氢钾（美国Thermo Fisher公司Arcos品牌，色谱纯，99%） 磷酸（国药集团，分析纯）

2.2 测试用标准品：甲酸（LCMS纯，美国Thermo Fisher公司）乙酸（LCMS纯，美国Thermo Fisher公司）；乳酸（食品级，95%，客户提供），丁酸（色谱级，客户提供）

2.3 色谱条件

色谱柱：Thermo Acclaim Mixed-Mode WAX-1（250mm×4.6mm，5um）

柱温：30 ℃；

进样量：10 μL；

流速：0.8ml/min；

检测波长：UV210nm；

流动相：乙腈：25mmol磷酸二氢钾（磷酸调PH3.93）（40:60），等度洗脱。

【样品提取】

3. 1 储备液：分别精确称取四种有机酸适量，水溶解，配制储备液 1000 μg/mL。

3.2 系列标准曲线：水溶剂，配制系列标准溶液10μg/mL– 1000μg/mL

3.3 供试品：精密称取酸奶1.2g，加8mL水，振摇1min，定容到10mL，4500r/m离心10min，过滤，取续滤液作为上机溶液。精密称取固体酵素1g，加8mL水，振摇1min，定容到10mL，4500r/m离心10min，过滤，取续滤液作为上机溶液。

【实验/操作方法】

4.1 重复性测试

采用上述仪器分析方法，4种单羧酸在20分钟内均可获得良好的色谱峰，分离效果良好。图1为四种有机酸200ppm浓度色谱图，各峰面积及保留时间RSD%值均小于0.6%，其中各化合物测试▲结果见表2。

4.2 线性范围测试

采用上述仪器分析方法，对4种有机酸进行线性范围测试，线性相关系数r2均大于0.999，线性关系良好。4种有机酸线性范围、线性相关系数、LOD（S/N>3）及LOQ（S/N>10)结果见表2，化合物线性方程图见图2。

4.3 样品测试

对市售的发酵酸奶和◥固体酵素饮料进行有机酸检测，乳酸均检出，其他干扰物与乳酸及其他几种有机酸位置互不影响。

【实验结果/结论】

4.1 WAX-1色谱柱独特的复合模式键合相，同时兼具反相和弱阴离子交换两种交换模式，此方法报告中4种有机酸主要通过离子交换模式进行保留，相比C18而言，具有不需要高水相，不需要添加离子对试剂的优势。方法重复性良好，4种有机酸在10-1000ppm范围内线性关系良好，高浓度有机酸峰形尖锐对称。

4.2 本方法非常适合用于发酵食品中单羧酸的检测。